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被wb 实验坑过或将要被坑的同学们,收藏好
发布时间:2019-01-02   点击次数:1255次

      在分子生物学实验中,wb 实验是基础的实验,也是大家平常遇到问题比较多的实验。实验中总会出现这样那样的问题,比方说背景太高、条带不清晰、无条带、条带太多太混乱等等,这令很多人无比头疼,不仅实验效率很低,还没有好的产出。殊不知,可能与实验技能无关,是使用了不太合适的实验用品导致的,真的是很冤啊。所以,做实验,购买合适的实验用品很关键。在上一期「好物推荐」中推荐了 wb 实验中用到的一款预制胶,很受欢迎。经过前期用户调研,本篇重点推荐另外几款学霸们说好的好货。


01 western 曝光专用膜

产品长约 13.5cm、宽约 9.5cm,可完全代替传统保鲜膜。将膜放入易杰膜中,加入发光液,将膜合拢,即可进入曝光程序。操作简单,方便使用,而且价格也很实惠,值得推荐。

02 超敏 ECL 化学发光大红鹰娱乐

做 WB 发光实验经常会出现「背景太高」的问题,要弄清楚「背景太高」的原因,先要知道「背景」是什么,「背景」也是发光,影响发光的因素就会影响背景。

当然,影响发光的因素很多,其中很重要的一个因素就是发光试剂。如果发光试剂不好,就会制造背景,这在较长时间曝光的情况下明显,有人做过实验,在较长曝光(30 分钟以上),的发光试剂背景明显较一般的发光试剂背景低,得到的图像也更漂亮,结果也更可靠。

对一些实验来说,如果实验结果本应是多条带,只是一些带由于蛋白量多且较强,短时曝光即可检测,而另一些带由于蛋白量相对较少,需要长时间曝光才可检测,这时候主要的影响因素就是发光试剂,因为如果加大抗体的量,普通的发光试剂背景也会相应加大,影响较弱条带的检测,如果减少抗体的量,普通的发光试剂较弱条带不易检测,长时间曝光同样隐藏在背景之中。这时如果不知道还有较弱条带的存在,实验的结论实际上被发光试剂影响了。如果有能长时间曝光而低背景的发光试剂,那么得到的结果就会非常可靠。


所以,采用的发光试剂,比如爱必信的发光液,它是基于新一代增强型化学发光底物研制而成,并对成分做了优化,其产品背景低,稳定性好,比普通 ECL 试剂敏感度高数十倍,可以得到漂亮、真实、可靠的发光结果。


03 蛋白预染 marker

通常,预染 marker 有 2 种:单色预染和多色预染。当然,多色预染比较容易辨认,一般都选择多色预染。实验要购买时可以有目的性地选择,不需要贵,只需要在你的蛋白大小接近的那个条带是容易辨认的,当然选这个就是合适的。有些实验中预染 maker 效果不好,条带不清晰,可能是被稀释了。在价格选取上,一般进口的要 2000 - 3000 元,国产的相对就会实惠很多,比如这一款,性价比高,一般上 5 - 10 微升就可以很清楚的看到条带。


04 WB solution base kit

在购买 wb 实验相关用品时,有一大串的 list,要购买各种抗体、电泳液、缓冲液、显色液等等,逐一询问,确实不省心。这款这一款试剂盒,里面含有 wb 实验的全套试剂组分,不需要另外再去分别找试剂去组合,不需要逐个去查找资料、去跟供应商沟通、询问价格或质量等问题,省去中间的所有环节,一次轻松搞定,非常方便,值得一试。


05 WB转膜液

该转膜液没有使用剧毒的甲醇或其它有毒试剂,安全无毒,使用无水乙醇配置,不会影响转膜效果。可用于Western 湿法电转膜。使用起来便捷,无需调节pH 值。同时,Western转膜液可以回收,回收后可以再使用1-2 次,节省试剂,但为了取得zui佳的转膜效果,建议使用没有使用过的转膜液。


06 蛋白印记膜再生液

蛋白印迹膜再生液,用于 Western blot 中转移了蛋白后膜的重复利用。在Western blot 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测 Actin 、Tubulin 等表达量相对稳定的蛋白作为参照,或检测其它蛋白进行比较。通过使用蛋白印迹膜再生液中特殊成分解离一抗二抗与印迹膜上抗原的结合从而去除一抗二抗,即可非常方便地重新利用同一张膜检测其它蛋白。

与重新跑一个 SDS-PAGE 胶比较,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使得实验结果的可比性大大增强。同时,该再生液不含有常用的 beta-巯基乙醇,无毒无味无害,室温下便可使用,可对同一膜进行 5 次以上的 Western Blot 检测。快 15-30 分钟就可以完成全过程。独有配方,效力强,对蛋白作用温和。


编辑: 丁香通

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